Préface
Ce rapport technique présente l'information de base ainsi que la procédure normale d'utilisation pour le test des comètes, lequel a pour but la détection des cassures de brin d'ADN chez les espèces de mammifères, d'oiseaux et d'amphibiens. La procédure décrite a été appliquée à des cellules de souris CD-1, de campagnol des champs (Microtus pennsylvanicus), de poulet (Gallus domesticus), de Canard colvert (Anas platyrhynchos), de grenouille léopard (Rana pipiens) et de grenouille verte (Rana clamitans). Des cellules d'autres espèces pourraient possiblement être utilisées, quoique les techniques devraient être validées au préalable.
La technique générale d'analyse des comètes comprend sept étapes : 1) diluer les cellules d'intérêt; 2) mélanger les cellules en suspension avec de l'agarose afin d'obtenir un microgel; 3) procéder à la lyse des cellules et des membranes nucléaires; 4) dérouler l'ADN exposé; 5) procéder à l'électrophorèse; 6) neutraliser l'ADN; 7) déshydrater les gels. La dilution cellulaire, la composition et le pH de la solution tampon, ainsi que le voltage et la durée de l'électrophorèse, dépendent du type de cellules. Afin de quantifier le dommage à l'ADN, une teinture se liant à l'ADN est alors appliquée au gel, et la migration de l'ADN est mesurée à l'aide d'un microscope à fluorescence et d'un programme informatique conçu à cet effet. Plusieurs mesures peuvent servir à quantifier la génotoxicité, mais les mesures les plus couramment utilisées sont la longueur de la queue des comètes, la proportion d'ADN dans la queue et le moment.
L'analyse des comètes est utile dans le cadre de contrôles biologiques étant donné que cette technique est assez peu dispendieuse (lorsque les équipements de base sont acquis), qu'elle est sensible, qu'elle requiert peu de cellules et que les données peuvent être générées rapidement. Cette technique est cependant très sensible à des changements subtils lesquels peuvent affecter les résultats de façon appréciable, et l'analyse des données n'est pas sans difficultés. Les chercheurs doivent donc être au courant de ces complexités en se familiarisant avec la littérature scientifique avant d'effectuer leurs travaux.
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