Séquençage de protéines et de peptides

Le service Séquençage de protéines et de peptides possède l'expertise et l'instrumentation permettant la caractérisation et l'identification de protéines. Le séquençage N-terminal se fait grâce à un système capillaire automatisé utilisant les réactions chimiques de la dégradation d'Edman qui permet d'obtenir des séquences avec moins d'une picomole de la protéine de départ. La séquence N-terminale est obtenue en faisant des cycles répétitifs de dégradation chimique d'Edman suivi de la détection du dérivé stable de l'acide aminé obtenu après chaque cycle. Ce dernier, dérivé en phenylthiohydantoin (PTH)-acide aminé, est identifié avec un système capillaire muni d'une colonne C18. La séquence en acides aminés est déterminée en comparant le temps d'élution de chaque PTH-acide aminé obtenu avec les temps de rétention des PTH-acides aminés standards.

Presque 75% des protéines chez les eucaryotes sont bloquées en N-terminal par des groupements chimiques (acetyl, pyroglutamate, formyl etc.) qui empêchent la dégradation d'Edman de s'effectuer. Dans ces cas, des digestions enzymatiques ou chimiques des protéines d'intérêt sont réalisées. Les peptides sont par la suite séparés et récupérés afin de les séquencer. Le service Séquençage de protéines et de peptides offre le soutien nécessaire pour la préparation de tels échantillons.