Méthodes de détermination des allergènes alimentaires -
Le Recueil des méthodes d'analyse des allergènes alimentaires
Contexte
Avec l'émergence de plusieurs méthodes de détection
des allergènes alimentaires, il était indispensable d'adopter
une stratégie uniforme d'évaluation et de validation
de ces dernières au cas où elles venaient à être
utilisées dans un contexte d'application de la réglementation
en vigueur. Les procédés d'évaluation des risques
requièrent que les résultats analytiques soient rapportés
en précisant la détection de marqueurs d'allergènes
dans les aliments analysés. Selon les procédures en vigueur
à Santé Canada, ces résultats doivent être
quantitatifs et doivent être exprimés en concentration de
protéines, à savoir en µg de protéines par
gramme de produit. Il importe donc de bien préciser les paramètres
d'étalonnage et les solutions standard utilisées dans
ces méthodologies, lesquelles doivent être exprimées
en fonction de leur « teneur en protéines ». En dépit
des différences qu'on connaît aux méthodes de dosage
des protéines en solution, le CMA a convenu d'estimer cette
teneur en procédant à l'analyse des solutions standard
incluses dans les trousses de dosage grâce à un dosage protéique
normalisé : dosage par la méthode à l'acide
bicinchoninique (test ABC) en utilisant l'albumine du sérum
bovin comme témoin. Bien que le comportement des protéines
solubles, marqueurs d'allergènes, varie d'une protéine
à l'autre et puisse se révéler différent
de celui de l'albumine bovine dans les conditions du test ABC, il
a tout de même été convenu, quoique sous réserve
de discussion, d'utiliser une référence commune (Albumine
de Sérum Bovine) pour les besoins du rapport de résultats.
Les paramètres de référence ainsi déterminés
devront être précisés à chaque fois qu'un
résultat d'analyse est rapporté pour un échantillon
donné, dans le cadre d'une inspection.
Un autre défi à relever dans la création du Recueil
de méthodes d'analyse des allergènes alimentaires
consiste à établir un processus d'évaluation
qui satisfait aux divers besoins des analystes sans pour autant imposer
une valeur seuil quant à la détection de marqueurs d'allergènes.
Il incombera aux utilisateurs de décider quelles méthodes,
parmi celles déjà existantes qui sont évaluées,
conviennent le mieux à leurs besoins d'analyse. Il est néanmoins
important d'établir un protocole homogène d'évaluation
dans la mesure du possible en définissant un ou plusieurs matériels
de référence qu'il est possible d'utiliser dans
les expériences de fortification (naturelle ou artificielle) pour
les matrices alimentaires d'intérêt. Selon la définition
du CMA, un matériel de référence est tout «
matériel représentatif de la denrée alimentaire allergène,
qui est bien caractérisé et qu'il est possible de
produire ou de rendre disponible avec des caractéristiques reproductibles
».
Critères d'évaluation
Le CMA a établi des critères généraux pour
la publication de méthodes d'analyse des allergènes
alimentaires dans le Recueil. Les principes généraux qui
sous-tendent ces critères sont les suivants :
- Le Recueil de méthodes vise à rapporter les résultats
de performance de méthodes qu'on a évaluées
conformément à un protocole expérimental donné.
La publication de la méthode dans le Recueil ne sous-entend pas
qu'elles sont approuvées ou entérinées par
Santé Canada.
- Le protocole d'évaluation sera conçu et mis en
œuvre en collaboration totale avec le concepteur de la méthode
évaluée, qu'il s'agisse d'un fabriquant
de trousses d'analyse commerciale ou d'un laboratoire privé,
universitaire ou gouvernemental. Il sera en outre personnalisé
en fonction des caractéristiques spécifiques de chaque
allergène étudié ainsi que des matériels
de référence développés correspondants.
- On visera deux niveaux d'évaluation :
- un niveau d'entrée, où une méthode
est évaluée expérimentalement par un seul laboratoire
affilié au CMA (laboratoires désignés de SC
et de l'ACIA) et par celui du concepteur de la méthode,
et
- un niveau d'évaluation complète où
les résultats sont générés par au moins
trois laboratoires affiliés au CMA et par celui du concepteur
auteur de la méthode.
- Il faudra définir, pour chaque méthode à évaluer,
le(s) matériel(s) de référence donné(s).
Chaque matériel défini devra avoir une validité
allant au-delà de son utilisation pour la trousse d'analyse
visée, ce qui permettra d'évaluer la performance
de plusieurs trousses, pour un allergène alimentaire donné,
de façon comparable.
- Les niveaux de fortification et matrices alimentaires à cibler
seront définis en fonction des affirmations de l'auteur/concepteur
de la méthode. On visera habituellement trois niveaux d'enrichissement,
un blanc, 2xLOQ (limite de quantification) et 5xLOQ.
- Le nombre de reproductibilités expérimentales a été
défini de manière à ce que le processus d'évaluation
et de validation ait un minimum d'impact sur les activités
des laboratoires gouvernementaux participants, dont la mission première
consiste à procéder à des activités de contrôle
et d'inspection plutôt qu'à l'évaluation
laborieuse de méthodologies.
- Le rapport sur la performance expérimentale des méthodologies
évaluées sera publié sur une version Web du Recueil
des méthodes d'analyse des allergènes. L'objectif
visé sera de rendre disponible le maximum de données de
performance sur les méthodes existantes, permettant ainsi aux
analystes de faire un choix documenté des méthodes d'analyse
qui satisfont le mieux à leurs besoins.
- Les données générées seront rendues disponibles
et publiées conformément à une entente intervenue
avec toutes les parties concernées, et en particulier avec le
concepteur ou auteur de la méthode en question. L'objectif
d'une telle approche est de rendre plus facilement accessible
la compréhension de la signification de résultats d'analyse
fournis par un tiers, en utilisant l'une des méthodes ainsi
évaluées.
- Les laboratoires fédéraux seront libres de recourir
aux techniques d'analyse de leur choix en fonction de leurs besoins.
Cette information ne sera pas rendue disponible sur la version Web du
Recueil car elle est sujette à changement et pourrait être
interprétée comme un geste approuvant ou entérinant
la méthode en question.
- Le Recueil des méthodes inclura également les rapports
de performance sur les méthodes de dosage des allergènes
évaluées ou validées sous les auspices d'autres
institutions comme l'AOAC International, ou en suivant des protocoles
établis par d'autres organisations de réglementation
tels les organismes affiliés à l'union Européenne
ou la US FDA, etc., après que le CMA les ait approuvés.
On fera la demande des autorisations nécessaires auprès
des organismes en question avant que la publication n'ait lieu
(*concepteurs /auteurs de méthodes, laboratoires de validation).
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