Annexe G

Glossaire des milieux
janvier 2006

GLOSSAIRE DES BOUILLONS,GÉLOSES ET AUTRES RÉACTIFS

Section C

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Milieu complet:

Dissoudre tous les ingrédients sauf le supplément dans 1,0 L d’eau distillée et faire bouillir pour dissoudre complètement. Stériliser à 121^oC pendant 15 minutes. Laisser refroidir à 50^oC. Ajouter les ingrédients du supplément à l’eau distillée. Mélanger soigneusement et stériliser par filtration à l’aide d’un filtre de 0,2 µm et ajouter de façon aseptique au milieu de base. Mélanger soigneusement et verser dans des boîtes de Pétri stériles.

Milieu complet:

Le milieu de base est disponible dans le commerce sous le nom de Base de gélose violet . Ajouter 31,0 g de base de gélose violet à l’eau distillée et mélanger soigneusement. Stériliser par filtration 100 mL de chacune des solutions aqueuses de rhamnose, de mannitol et de xylose à 20 %. Laisser refroidir le milieu de base, ajouter 50,0 mL de la solution de glucide stérile, puis couler en couches épaisses. Les géloses se conservent à 4^oC pendant 2 à 3 semaines. Le laboratoire qui veut les garder plus longtemps doit effectuer les validations requises.

Milieu complet:

Le milieu de base est disponible dans le commerce sous le nom de Base de bouillon violet . Ajouter 16,0 g de base de bouillon violet à l’eau distillée et mélanger soigneusement. Répartir des volumes de 9,0 mL dans des éprouvettes de 16 x 125 mm contenant des ampoules de Durham. Stériliser à 121^oC pendant 15 minutes. Préparer des solutions à 5 % de tous les glucides, sauf l'esculine, et stériliser par filtration. Ajouter 1,0 mL de solution de glucide à 9,0 mL de base de bouillon de manière à obtenir une concentration finale de 0,5 % de glucide dans le bouillon.

Note : Ajouter l'esculine directement à la base de bouillon pour produire une solution à 0,5 % et stériliser à 115^oC pendant 15 minutes. À la température ambiante, une solution d'esculine à 5 % est gélatineuse et ne peut être prélevée au moyen d'une pipette.

Milieu complet:

Suspendre les ingrédients sauf le CaCl 2 dans l’eau. Chauffer jusqu’à ébullition pour dissoudre complètement et refroidir à 50^oC. Ajouter 9,0 mL de CaCl 2 à 1% stérilisé par filtration. Distribuer dans des éprouvettes d’une capacité de 6,0 à 8,0 mL dotées d’un bouchon vissant jusqu’à moins de 5,0 mm du bord. Stériliser à 121^oC pendant 15 minutes.

Milieu complet:

Dissoudre les ingrédients dans l’eau. Ajuster le pH et répartir des volumes de 10,0 mL dans des flacons de 50 mL. Stériliser à 121^oC pendant 15 minutes

Milieu complet:

Ajouter les ingrédients à l’eau distillée. Chauffer doucement et porter à ébullition. Stériliser à 118^oC pendant 15 minutes à une pression de 13 livres/po 2 (psi). Répartir.

Coagulase Plasma [Plasma pour l’épreuve de la coagulase]

Le plasma de lapin homologué renfermant de l’EDTA est disponible sur le marché. Reconstituer selon les instructions du fabricant. On peut garder le plasma reconstitué au réfrigérateur jusqu’à 14 jours sans qu’il ne perde de son activité. Il ne faut pas l’utiliser en cas de contamination massive. Après avoir été gardée au réfrigérateur, la solution de plasma est assez froide pour retarder la formation d’un caillot pour 10-15 minutes. Pour éviter ce délai, il suffit de chauffer la solution de plasma à 35^oC avant de l’utiliser.

Si le produit déshydraté n’est pas disponible, utiliser du plasma frais de lapin déposé de façon aseptique dans des contenants renfermant de l’EDTA (1,0 mL d’une solution à 15 % de sel de potassium par 100 mL de sang). Diluer le plasma à 1:2 ou 1:3 avec de l’eau distillée stérile et tester chaque lot avec des souches de staphylocoques à coagulase positive et à coagulase négative avant d’utiliser de façon routinière.

Milieu complet:

On peut préparer ce milieu en répartissant 2,5 g d'un milieu préparé et déshydraté dans des éprouvettes de format 20 x 150 mm munies d’un bouchon qui visse; ajouter 20,0 mL d'eau distillée froide; mélanger soigneusement et laisser reposer de façon à permettre l'humidification complète de toutes les particules. Stériliser pendant 15 minutes à 121^oC ou l'équivalent. On peut habituellement conserver le milieu préparé et stérilisé au réfrigérateur ( 0^oC à 4^oC) jusqu'à 4 semaines sans qu’il se détériore. Avant de l’utiliser, il faut désaérer le milieu réfrigéré à 100^oC pendant 10 minutes et laisser refroidir à la température de la pièce.

Milieu complet:

Dissoudre le violet de gentiane dans l’alcool et l’oxalate d’ammonium dans l’eau distillée. Mélanger les deux solutions et entreposer le mélange pendant 24 heures avant de l’utiliser.