Annexe G
Glossaire des milieux
janvier 2006
GLOSSAIRE DES BOUILLONS,GÉLOSES ET AUTRES RÉACTIFS
Section O
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| O-Nitrophenyl-beta-D-galactoside (ONPG) [O-Nitrophényl-beta-D-galactoside (ONPG)] |
| Solution de phosphate monosodique, 1,0 M |
| Phosphate monosodique (NaH 2PO 4.H 2O) |
6,9 g |
| Eau distillée |
45,0 ml |
| Hydroxyde de sodium (NaOH 30% p/v) |
3,0 ml |
| pH 7,0 |
|
| ONPG |
|
| ONPG |
80,0 g |
| Eau distillée |
15,0 ml |
| Solution de phosphate monosodique |
5,0 ml |
Milieu complet:
Solution de phosphate monosodique : Ajouter le phosphate monosodique à l'eau distillée et agiter pour dissoudre. Ajouter le NaOH et ajuster le pH à 7,0. Porter le volume à 50,0 ml avec l'eau distillée et réfrigérer.
ONPG : Dissoudre l'ONPG dans l'eau distillée réchauffée (37oC) et ajouter la solution de phosphate monosodique. La solution devrait être incolore. Conserver au réfrigérateur. Avant d'utiliser, réchauffer à 37oC le volume de solution d'ONPG requis.
| Orange Serum Agar (OSA) [Gélose au sérum et à l'orange] |
| Milieu de base |
| Tryptone ou trypticase |
10,0 g |
| Extrait de levure |
3,0 g |
| Dextrose |
4,0 g |
| Phosphate dipotassique (K 2HPO 4) |
2,5 g |
| Gélose |
17,0 g |
| Cystéine |
0,001 g |
| Sérum à l'orange |
200 ml |
| Eau distillée |
800 ml |
| pH 5,5 ± 0,2 |
|
| Sérum à l'orange |
|
| Jus d'orange fraîchement pressé ou concentré de jus d'orange congelé reconstitué |
1,0 L |
| Adjuvant de filtration |
30,0 g |
Milieu complet:
Ajouter les ingrédients du milieu de base à 800 ml d'eau distillée. Chauffer jusqu'à ébullition avec agitation constante pour dissoudre tous les ingrédients. Stériliser à 121oC pendant 15 minutes. Ne pas surchauffer car ceci pourrait donner un milieu ramolli.
Sérum à l'orange : Préparer le sérum à l'orange en faisant chauffer 1,0 L de jus d'orange fraîchement pressé ou de concentré de jus d'orange congelé reconstitué, jusqu'à ce que la température atteigne environ 93oC (200oF). Ajouter 30,0 g "d'adjuvant de filtration" et mélanger soigneusement. Filtrer par succion dans un entonnoir Buchner sur un papier filtre recouvert au préalable « d'adjuvant de filtration ». Jeter les premiers millilitres de sérum filtré.
| Oxford Agar (OXA) [Gélose Oxford] |
| Milieu de base |
| Milieu de gélose au sang Columbia |
39,0 g |
| Esculine |
1,0 g |
| Citrate d'ammonium et de fer |
0,5 g |
| Chlorure de lithium (LiCl) |
15,0 g |
| Gélose |
2,0 g |
| Eau distillée |
1,0 L |
| pH 7,2 ± 0,2 |
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| Supplément par 10 ml (disponible dans le commerce) |
|
| Cycloheximide |
400 mg |
| Sulfate de colistine |
20,0 mg |
| Acriflavine |
5,0 mg |
| Céfotétan |
2,0 mg |
| Fosfomycine |
10,0 mg |
Milieu complet:
Ajouter les ingrédients du milieu de base à 1,0 L d'eau distillée. Chauffer jusqu'à ébullition avec agitation constante pour dissoudre les ingrédients. Stériliser à 121oC pendant 15 minutes et laisser refroidir à 45-50oC. Ajouter aseptiquement 10 ml de supplément et répartir. Entreposer au réfrigérateur dans l'obscurité (l'acriflavine peut être photo-oxydé et former des composés inhibiteurs pour les Listeria spp.).
Supplément : Dissoudre les ingrédients du supplément dans 10 ml d'un mélange 1:1 d'éthanol et d'eau distillée. Stériliser par filtration.
| Oxidase Reagent [Réactif pour l'épreuve de l'oxidase] |
| Milieu de base |
|
| N,N,N' N'-Tétraméthyl-p-phénylènediamine.2HCl |
1,0 g |
| Eau distillée |
100 ml |
Milieu complet:
Le réactif peut être conservé jusqu'à sept jours s'il est gardé réfrigéré dans une bouteille de verre foncé; sinon, il faut l'utiliser le jour même de la préparation.
Alternative : L'épreuve de l'oxidase peut être effectuée à l'aide d'une solution composée de chlorhydrate de N,N-diméthyl-p-phénylènediamine à 1 %.
Oxidative-Fermentative (OF) Glucose Media , Semisolid
[Milieu glucosé oxydant-fermentatif (OF), semi-solide] |
| Milieu de base |
| Tryptone |
2,0 g |
| Chlorure de sodium (NaCl) |
5,0 g |
| Phosphate dipotassique ( K 2 HPO 4 ) |
0,3 g |
| Bleu de bromothymol |
0,03 g |
| Gélose |
2,0 g |
| Glucose |
10,0 g |
| Eau distillée |
1,0 L |
| pH 6,8 ± 0,2 |
|
Milieu complet:
Ajouter les ingrédients du milieu de base à 1,0 L d'eau distillée. Chauffer jusqu'à ébullition avec agitation constante pour dissoudre les ingrédients. Répartir en portions de 5 ml et stériliser à 121o C pendant 15 minutes.
| Note : Pour les Vibrio spp. halophiles, ajouter 15,0 g de NaCI supplémentaire (concentration finale de 2 % de NaCl). |
| Note : Pour utiliser le milieu OF avec des glucides autres que le glucose, préparer le milieu sans glucose dans 900 ml d'eau distillée, stériliser à l'autoclave tel que décrit ci-dessus et laisser refroidir à 45-50oC. Ajouter au milieu de base 100 ml d'une solution de glucide à 10% stérilisée par filtration et répartir. |
Oxytetracycline Glucose Yeast Extract Agar (OGYE)
[Gélose oxytétracycline, glucose et extrait de levure] |
| Milieu de base |
| Extrait de levure |
5,0 g |
| Dextrose |
20,0 g |
| Gélose |
12,0 g |
| Eau distillée |
1,0 L |
| pH 7,0 ± 0,2 |
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| Supplément oxytétracycline GYE (disponible dans le commerce) |
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| Oxytétracycline |
0,1 g |
| Eau distillée |
10,0 ml |
Milieu complet:
Ajouter les ingrédients du milieu de base à 1,0 L d'eau distillée. Chauffer jusqu'à ébullition avec agitation constante pour dissoudre tous les ingrédients. Stériliser à 121oC pendant 15 minutes et refroidir à 45-50oC. Ajouter de façon aseptique la solution stérile d'oxytétracycline et mélanger soigneusement. Répartir dans des boîtes de Pétri.
Supplément : Ajouter l'oxytétracycline à l'eau distillée et porter le volume à 10,0 ml. Mélanger soigneusement et stériliser par filtration.
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