Supplément 2 à la méthode MFLP-30
novembre 2006
(Version PDF)

Supplément 2 à la méthode MFLP-30 L'utilisation de l'analyse MP BAX pour E. COLI P157:H7

Comité des méthodes microbiologiques
Division de l'évaluation de microbiologie
Bureau des dangers microbiens, Direction des aliments
Direction générale des produits de santé et des aliments, Santé Canada Localisateur postal : 2204A1
Ottawa (Ontario) K1A 0L2

Courriel : Don_Warburton@hc-sc.gc.ca

1. Application

Les renseignements qui suivent sont présentés à titre de supplément à la méthode MFLP-30, datée de mars 2003, et doivent être utilisés avec cette méthode. Ce supplément vise à fournir des renseignements supplémentaires (comme des sources de matériaux, des étapes critiques, des étapes de confirmation et/ou des conseils utiles, etc.)

L'analyse de Bax pour E. COLI O157:H7 MP peut être substituée par la trousse décrite dans MFLP-30.

6. Matériel et équipements spéciaux

Le milieu donné ci-dessous est offert commercialement et doit être préparé et stérilisé selon les instructions du fabricant.

1. Milieu MP du système BAX pour E. COLI O157:H7 (pour le boeuf seulement)
2. Bouillon de trypticase soja modifié avec novobiocine (M-TSB-n) (voir le supplément 1 à la méthode MFLP-30)
3. Eau peptonée tamponnée (EPT) pour les aliments et les échantillons secs
4. Trousse d'analyse MP du système BAX pour E. COLI O157:H7

7. Marche à suivre

7.1 Utiliser les renseignements suivants conjointement avec la méthode MFLP-30. Préparer le volume requis soit du milieu MP du système BAX pour E. COLI O157:H7 conformément aux instructions sur l'étiquette du contenant ou du mTSB-n selon les instructions données à l'annexe G.

7.1.1. Préparer une dilution 1:10 de l'aliment en ajoutant de façon aseptique 25 g ou ml (ou autre unité analytique adéquate) dans 225 ml (ou la quantité nécessaire pour maintenir un rapport de 1:10) de bouillon d'enrichissement, comme spécifié ci-dessous. Passer au Stomacher ou au mélangeur.

7.2 Utilisation du milieu MP du système BAX pour E. COLI O157:H7 :

7.2.2 Boeuf - utilisation du milieu d'enrichissement MP du système BAX : Ajouter du boeuf cru au bouillon du milieu MP du système BAX préchauffé. Incuber à 42ºC pendant 8 à 24 heures.

7.3 Utilisation du mTSB-n (MFLP-80) :

7.3.1 Produits laitiers, viande, fruits et légumes - Ajouter du mTSB-n préchauffé et incuber à 42ºC pendant 18 à 24 heures.

7.3.2 Aliments secs et autres échantillons secs (p. ex., des échantillons environnementaux et des aliments pour animaux) - Ajouter suffisamment d'EPT à l'échantillon pour l'humidifier et laisser équilibrer une heure à 35ºC. Ajouter le mTSB-n préchauffé et incuber à 42ºC pendant 18 à 24 heures.

Après l'incubation à 42ºC pendant 18 à 24 heures, retirer les aliquotes pour effectuer l'analyse avec le système BAX. Réincuber les échantillons au besoin pendant que l'analyse BAX est en cours, pour s'assurer que la durée requise d'incubation de 22 à 24 heures est terminée si une confirmation par la méthode MFLP-80 est requise.

7.4 Préparation de l'équipement Bax :

Consulter la méthode MFLP-30.

7.5 Lyse :

7.5.1 Utiliser le milieu MP du système BAX pour E. COLI O157:H7 : Pour produits de boeuf incubés dans le milieu MP du système BAX pour E. COLI, transférer 20 μl au tube de lyse correspondant.

7.5.2 Utilisation du mTSB-n (MFLP-80) : Transférer 5 μl des échantillons qui ont été incubés dans du mTSB-n au tube de lyse correspondant.

7.5.3 Continuer selon la méthode MFLP-30.

7.6 Confirmation :

Suivre la méthode MFLP-80 pour les étapes d'isolement sélectif et de confirmation.