|
Procédure de laboratoire
MFLP-29
Juin 2003
Version PDF
DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE
SANTÉ ET DES ALIMENTS
OTTAWA
LA MÉTHODE DU SYSTÈME QUALICON BAX® POUR LA
DÉTECTION DE SALMONELLA DANS UNE VARIÉTÉ
D'ALIMENTS
1. APPLICATION
Cette méthode est applicable à la détection de
Salmonella dans une variété d'aliments, y
compris dans la viande, la volaille, le poisson et les fruits
de mer, les fruits et légumes, les produits laitiers et
divers produits alimentaires.
2. DESCRIPTION
Le système BAX® est un instrument
pratique de dépistage oui/non qui utilise la technologie
de la réaction en chaîne de la polymérase
(PCR) pour l'amplification rapide et la détection par
fluorescence. Les transformateurs d'aliments et les
laboratoires associés peuvent utiliser le système
BAX® comme méthode rapide permettant de
détecter avec précision la présence de
Salmonella dans une grande variété
d'aliments. Après un préenrichissement de 22 à
26 heures (et une régénération de trois heures
pour certains types d'aliments), la préparation des
échantillons requiert environ une heure du temps de
l'utilisateur, et la procédure automatisée donne
des résultats fiables dans un délai d'environ
quatre heures. Les études de validation du système
BAX® utilisaient la méthode
d'enrichissement du USDA-FSIS (United Sates Department of
Agriculture - Food Safety and Inspection Service) pour la
viande, les volailles et les oeufs et la méthode FDABAM
pour les autres types d'aliments. La validation a
également été effectuée en utilisant les
méthodes d'enrichissement ISO pour tous les aliments
(voir la section 8: Méthodes de référence). Le
système BAX® est conçu pour
être utilisé par un personnel de laboratoire
qualifié qui suit les procédures normalisées
de microbiologie.
3. PRINCIPE
Le système BAX® utilise la technologie
de la réaction en chaîne de la polymérase
(PCR) pour amplifier un fragment précis de l'ADN
bactérien, qui est stable et non affecté par
l'environnement de croissance. Ce fragment est une
séquence génétique unique de
Salmonella, c'est pourquoi la méthode constitue un
indicateur très fiable de la présence de cet
organisme. Le système BAX®
automatisé utilise ensuite la détection par
fluorescence pour analyser le produit de la PCR et
déterminer si les résultats sont positifs ou
négatifs.
Le PCR représente un moyen puissant d'offrir rapidement
des millions de copies d'un fragment précis d'ADN. Dans
une application typique, on combine l'échantillon d'ADN
à une polymérase, des nucléotides et des
amorces spécifiques à une séquence donnée
de nucléotides. Ce mélange est alors soumis à
une série de cycles chronométrés de chauffage
et de refroidissement. Le chauffage dénature ou
sépare l'ADN en brins distincts. À mesure que le
mélange refroidit, les amorces reconnaissent la
séquence cible d'ADN et s'y fixent par annelage. L'ADN
polymérase utilise ensuite les nucléotides pour
étendre les amorces, ce qui a pour effet de créer
deux copies du fragment d'ADN cible. Des cycles
répétés de dénaturation, d'hybridation et
d'élongation produisent des augmentations exponentielles
du nombre de fragments d'ADN cibles en quelques heures à
peine. Si la séquence cible n'est pas présente, il
ne se produit aucune amplification détectable.
Le système BAX® simplifie ce processus
en combinant les amorces, la polymérase, les
nucléotides et le témoin positif dans une seule
tablette d'échantillon déjà emballée dans
des tubes PCR. De plus, la détection automatique par
fluorescence permet les tests en tubes fermés,
éliminant virtuellement la possibilité de
contamination entraînée avec l'ADN amplifié.
|
