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Procédure de laboratoire MFLP-33
Janvier 2003
(Version PDF)
DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE SANTÉ ET DES ALIMENTS
OTTAWA
DÉTECTION DE LISTERIA MONOCYTOGENES DANS LES ALIMENTS ET LES ÉCHANTILLONS
ENVIRONNEMENTAUX PAR LA MÉTHODE VIDAS LMO 2TM
Don Warburton et Ann Boville
Bureau des dangers microbiens, Direction des Aliments
Repère postal : 2204A1
Santé Canada, Ottawa ON K1A 0L2
Courriel : Don_Warburton @hc-sc.gc.ca
1. APPLICATION
Cette méthode s'applique à la détection de Listeria monocytogenes dans
les aliments afin de déterminer s'il y a conformité avec les articles 4 et 7 de la
Loi sur les aliments et drogues.
2. DESCRIPTION
La méthode VIDAS Listeria monocytogenes LMO 2 a été homologuée par
l'Association Française de Normalisation (AFNOR) le 3 juillet 2002 en tant que
méthode rapide d'analyse pour tous les produits alimentaires humains. Cette homologation a
été obtenue en accord avec la méthode de référence décrite dans la
norme française n BIO 12/9-07/02 (8.2). L'homologation a été appliquée aux
échantillons environnementaux le 18 septembre 2002, selon la même méthode de
référence. La méthode a été modifiée par Warburton et coll. (8.4) afin
de permettre l'utilisation d'un bouillon unique (le bouillon Palcam) comme milieu de
pré-enrichissement pour tous les échantillons alimentaires et environnementaux.
3. PRINCIPE
L'essai VIDAS LMO 2 est un test d'immuno-analyse enzymatique par fluorescence à
utiliser sur le système VIDAS pour la détection qualitative des Listeria
monocytogenes. La surface interne du cône, un dispositif jetable semblable à un embout
de pipette, est recouverte avec des anticorps anti-L. monocytogenes durant la production. La
configuration de l'essai VIDAS LMO 2 empêche les réactions non-spécifiques avec
le cône. Les réactifs nécessaires à un essai sont contenus dans une cartouche
scellée à chambres multiples.
L'appareil VIDAS effectue toutes les étapes de l'analyse de façon
séquentielle et automatique. L'échantillon est inoculé dans la cartouche de
réactifs et subit ensuite un cycle d'aspiration /refoulement d'une durée
déterminée dans le cône. Les antigènes L. monocytogenes présents
dans l'échantillon se fixent sur les anticorps monoclonaux anti-L. monocytogenes
fixés sur la paroi du cône. La partie non fixée de l'échantillon est
éliminée par lavage. Par la suite, des anticorps conjugués à la phosphatase
alcaline sont aspirés/refoulés dans le cône et réagissent avec les complexes
antigène-anticorps de L. monocytogenes déjà fixés sur la paroi du
cône. Le conjugué non fixé est éliminé par lavage.
Le substrat fluorescent, soit le 4-méthyl-umbelliferyl phosphate, est ensuite
aspiré/refoulé dans le cône et il y est transformé par l'enzyme du
conjugué en un produit fluorescent, le 4-méthyl-umbelliferone. L'intensité de la
fluorescence est alors mesurée à 450nm.
VIDAS LMO 2TM est une marque de commerce déposée de bioMérieux.
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