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Procédure de laboratoire MFLP-75
juin 2004
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DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE SANTÉ ET DES ALIMENTS
OTTAWA
Méthode d'isolement de Salmonella spp. sur milieu modifié semi-solide de
rappaport-vassiliadis (MSRV)
C. Poppe1, E.D. Mann2, S. Shaw3, D. Warburton
4 et A. Sewell4
Laboratoire de référence pour les salmonelloses1,2
Laboratoire des zoonoses alimentaires, Santé Canada,
Guelph, N1G 3W4
Services de laboratoire3, [Agriculture] Agence canadienne de l'inspection des aliments,
Ottawa,
Division de l'évaluation4, Bureau des dangers microbiens
Santé Canada, K1A 0L2
1. APPLICATION
Cette méthode est applicable à la détection des espèces viables et mobiles de Salmonella
dans les provendes, les aliments crus, les fèces, le fumier, le duvet, la poussière et autres
échantillons environnementaux. Ce test de dépistage convient également pour les aliments
transformés et les échantillons environnementaux. La méthode ne devrait pas être utilisée pour
la culture des échantillons lorsque la maladie Pullorum ou la Typhoïde aviaire, causées
respectivement par S. Pullorum et S. Gallinarum, est suspectée. Cette méthode révisée remplace
la méthode MFLP-75 datée de septembre 1998 et le supplément daté de septembre 1999.
2. DESCRIPTION
Cette méthode a été mise au point par Chau et Huang (8.2) et DeSmedt et coll. (8.4, 8.5) et a
été comparée à la méthode de la DGPS (MFHPB-20) par Poppe et coll. (8.9, 8.10) et Oggel et coll.
(8.8) pour l'isolement de Salmonella. Cette méthode est fondée sur la capacité des
espèces de Salmonella de se reproduire et d'être mobiles dans le milieu modifié
semi-solide de Rappaport-Vassiliadis (MSRV) après incubation à 42°C sous des conditions
adéquates d'humidité. La plupart des souches de Salmonella sont capables de migrer à
plus de 20 mm du point d'inoculation en 24-48 heures (un minimum de 48 heures est recommandé pour
les aliments transformés et autres échantillons ayant subi un stress). L'utilisation de ce milieu
peut réduire de 24 heures le temps requis pour l'identification d'un échantillon positif
comparativement à la méthode conventionnelle de culture.
3. PRINCIPE
Le milieu MSRV est composé d'une gélose semi-solide très molle. Les boîtes de gélose sont
fragiles et il faut les manipuler avec soin. Elles sont toutefois très simples à utiliser et
permettent habituellement de poser un diagnostic sérieux sur la présence présumée de Salmonella
moins de 48 heures après l'ensemencement des bouillons de pré-enrichissement. Après le
pré-enrichissement, la gélose MSRV est ensemencée. Les Salmonella mobiles migrent au travers de
la surface de la gélose semi-solide.
Note: Cette méthode ne détecte pas les Salmonella non mobiles.
Aucune souche pathogène non mobile n'a été incriminée dans les intoxications alimentaires depuis
1964 (8.11; E.C.D. Todd, comm. pers.). Les souches non mobiles représentent moins de 1% des
isolats provenant des échantillons cliniques et des provendes (J. Oggel, Agriculture et
Agro-Alimentaire Canada (AAAC) et H. Lior, Direction générale de la protection de la santé (DGPS),
comm. pers.). Des épreuves de confirmation biochimique et sérologique sont effectuées sur des
colonies isolées.
4. DÉFINITIONS DES TERMES
Voir l'annexe A du volume 3.
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