Procédure de laboratoire MFLP-78
Avril 2002
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1. APPLICATION

Cette méthode permet une identification rapide de Listeria monocytogenes isolé dans les aliments, de même que dans les échantillons environnementaux et cliniques, au moyen des méthodes MFHPB-30 (5.5), MFLP-38 (5.6) et MFLP-74 (5.4) de Santé Canada. Elle peut s'appliquer à la caractérisation et à l'identification de colonies présumées positives qui sont isolées sur des géloses sélectives comme Palcam (PAL), Oxford (OX) et Oxford modifiée (MOX) et sur toute autre gélose régulièrement utilisée pour isoler cet agent pathogène. La méthode de la DPGS peut aussi servir à confirmer les colonies trouvées positives par amplification en chaîne par polymérase (ACP). La méthode d'amplification en chaîne par polymérase (ACP) est protégée par des brevets américains dont le titulaire est Hoffman-LaRoche. Cette méthode révisée remplace la méthode MFLP-78 datée de septembre 1995.

2. PRINCIPE

Après pré-enrichissement et enrichissement sélectif, un certain nombre de colonies présumées positives décelées par ensemencement sur géloses sélectives sont soumises à une ACP qui amplifie une séquence d'ADN spécifique du gène codant pour la listériolysine (hlyA). Les oligonucléotides servant d'amorce pour l'ACP sont hautement spécifiques à Listeria monocytogenes et n'amplifient pas l'ADN présent chez les autres espèces de Listeria ni chez les autres organismes. Le fragment d'ADN hlyA amplifié qui en résulte a une taille moléculaire spécifique définie par les amorces et est facilement identifié par électrophorèse sur gel d'agarose.

Cette méthode permet d'identifier les colonies présumées positives en quatre heures et, dans la plupart des cas, peut remplacer la gamme habituelle de tests biochimiques et d'épreuves de confirmation, ce qui représente des économies considérables de temps, de travail et d'argent. La technique d'ACP s'est révélée hautement spécifique et sensible pour l'identification de L. monocytogenes (5.1) isolé dans divers produits, y compris les produits laitiers, les oeufs, le fromage et les échantillons environnementaux (5.2).