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Procédure de laboratoire MFLP-88
septembre 1996
(Version PDF)
DIRECTION GÉNÉRALE DE LA PROTECTION DE LA SANTÉ
OTTAWA
IDENTIFICATION DU LISTERIA MONOCYTOGENES AU MOYEN D’ACCUPROBEMD (Test «Rapid
DNA Probe» d’AccuProbe)
Jeffrey M. Farber et Elaine Daley
Division de la recherche microbiologique
Bureau de dangers microbiens, Direction des aliments
DGPS, localisateur postal 2204A2
Ottawa (Ontario) K1A 0L2
1. APPLICATION
Cette méthode peut servir à identifier des colonies de Listeria monocytogenes
présumées isolées au moyen des méthodes MFLP-74 et MFHPB-30.
2. PRINCIPE
LE TEST D’IDENTIFICATION DU LISTERIA MONOCYTOGENES ACCRUPROBEMD est un moyen
objectif rapide d’identifier avec certitude le L. MONOCYTOGENES fondé sur la
détection de séquences spécifiques d’ARN ribosomique qui sont particulières
au L. MONOCYTOGENES.
Les tests d’hybridation des acides nucléides sont fondés sur la capacité de
brins complémentaires d’acide nucléique de s’aligner de façon
spécifique et de lier pour former des complexes stables à double brin. Le système
AccuprobeMD utilise une sonde ADN à brin simple, chimioluminescente et marquée
à l’ester d’acridinium, qui est complémentaire de l’ARN ribosomique de
l’organisme cible. Lorsque la sonde ADN marquée s’unit de façon hybride à
l’ARN ribosomique de l’organisme visé pour former un complexe hybride ADN:ARN
stable, l’acridinium est protégé contre l’hydrolyse chimique et peut
réagir avec le peroxyde d’hydrogène dans des conditions de base pour produire de la
chimioluminescence. Si la sonde demeure libre, la liaison estérifiée est hydrolysée et
rend l’acridinium non chimioluminescent en permanence. Les hybrides ADN:ARN marqués sont
mesurés au moyen d’un luminomètre Gen-Probe. Une lecture de luminomètre
égale ou supérieure à une valeur seuil constitue un résultat positif.
L’analyse prend moins d’une heure au total.
AccuProbe est une marque déposée de Gen-Probe Incorporated, San Diego, CA 92121.
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