Procédure de laboratoire MFLP-95
septembre 2000
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1. APPLICATION

La méthode sert à détecter la présence d’Escherichia coli O157:H7 dans les aliments (comme le jus de pomme, le bœuf cru et les légumes) et les échantillons environnementaux afin d’en déterminer la conformité avec les articles 4 et 7 de la Loi des aliments et drogues.

2. DESCRIPTION

Il a été démontré que cette méthode donne des résultats satisfaisants avec des aliments contaminés artificiellement et le bœuf haché cru contaminé naturellement dans les études de l’AOAC (8.1), qui ont porté notamment sur le jus de pomme, la laitue rincée, les cubes de bœuf cru, le bœuf haché cru et les échantillons environnementaux. Elle peut servir à déceler la présence d’E. coli O157:H7 dans d’autres produits et échantillons.

3. PRINCIPE

À la suite de l’enrichissement sélectif dans du bouillon de trypticase de soya modifié avec novobiocine ou dans du bouillon EC modifié avec novobiocine, on dépose une partie de l’échantillon enrichi dans la cupule de l’unité d’essai Reveal, il y a migration dans la fenêtre de visualisation. L’unité d’essai Reveal contient des anticorps qui ont une grande spécificité pour les antigènes d’E. coli O157:H7. Les anticorps sont fixés à de l’or en suspension colloïdale et aussi, d’autre part, à une matrice de soutien solide. Tout antigène d’E. coli O157:H7 présent se fixera aux anticorps conjugués à l’or pour former un complexe antigène – anticorps – chromogène. Ce complexe traverse une membrane à évacuation latérale et est fixé ensuite par l’anticorps immobilisé sur la membrane. La fixation provoque la précipitation du conjugat d’or et forme une ligne visible, ce qui indique une réaction positive. Une ligne de contrôle qui se forme plus haut dans la fenêtre d’essai indique que le test s’est déroulé et s’est terminé comme il se doit et vérifie la validité du test. L’absence de ligne de contrôle rend le test non valide. Consigner les résultats après quinze minutes d’incubation.

4. DÉFINITIONS

Voir annexe A du volume 3, termes 1,2,3,4.

5. PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS

Voir annexe B du volume 3.

6. MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENT SPÉCIAL

1) Système Reveal (Neogen Corporation; téléphone : 1-800-234-5333, télécopieur :  
(517) 372-0108.

2) Bouillon de trypticase de soya modifié avec novobiocine (base vendue dans le commerce; Acumedia, Baltimore, MD)

3) Bouillon d’E. coli modifié avec novobiocine (base vendue dans le commerce; Acumedia, Baltimore, MD)

4) BCM O157:H7 de Biosynth + gélose chromogène (Biosynth, Naperville, IL)