Procédure de laboratoire
MFLP-28 Juin 2003
(Version PDF)

DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE SANTÉ ET DES ALIMENTS
OTTAWA

LA MÉTHODE DU SYSTÈME QUALICON BAX® POUR LA DÉTECTION DE LISTERIA MONOCYTOGENES DANS UNE VARIÉTÉ D'ALIMENTS

1. APPLICATION

Cette méthode est applicable à la détection de Listeria monocytogenes dans une grande variété d'aliments, y compris les viandes crues, les viandes transformées, les fruits de mer, les fruits et légumes frais, les produits laitiers fermentés et non fermentés, les oeufs et les produits à base d'oeufs et les jus de fruits.

2. DESCRIPTION

Le système BAX® est un instrument pratique de dépistage oui/non qui utilise la technologie de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) pour l'amplification rapide et la détection par fluorescence. Les transformateurs de produits alimentaires et les laboratoires associés peuvent se servir du système BAX® comme méthode rapide permettant de détecter avec précision les Listeria monocytogenes dans une grande variété d'aliments. Après la période d'enrichissement primaire de 22 à 26 heures et d'enrichissement secondaire de 18 à 24 heures, la préparation de l'échantillon requiert environ une heure du temps de l'utilisateur, et la procédure automatisées donne des résultats fiables dans un délai d'environ 4 heures. Les études portant sur la validation du système BAX® utilisaient la méthode d'enrichissement du USDA-FSIS pour la viande, la volaille et les oeufs; la méthode 993.12 de l'AOAC pour les produits laitiers; et la méthode FDA-BAM pour les autres types d'aliments (voir la section 8 : Méthodes de référence). Le système BAX® est conçu pour être utilisé par un personnel de laboratoire qualifié qui suit les procédures normalisées de microbiologie.

3. PRINCIPE

Le système BAX® utilise la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) pour amplifier un fragment précis de l'ADN bactérien qui est stable et non affecté par l'environnement de croissance. Le fragment est une séquence génétique unique à Listeria monocytogenes. C'est pourquoi la méthode constitue un indicateur très fiable de la présence de Listeria monocytogenes. Le système BAX® automatisé utilise ensuite la détection par fluorescence pour analyser le produit de la PCR et déterminer si les résultats sont positifs ou négatifs.

Le PCR représente un moyen puissant d'offrir rapidement des millions de copies d'un fragment précis d'ADN. Dans une application typique, on combine l'échantillon d'ADN à une polymérase, des nucléotides et des amorces spécifiques à une séquence donnée de nucléotides. Ce mélange est alors soumis à une série de cycles chronométrés de chauffage et de refroidissement. Le chauffage dénature ou sépare l'ADN en brins distincts. À mesure que le mélange refroidit, les amorces reconnaissent la séquence cible d'ADN et s'y fixent par annelage. L'ADN polymérase utilise ensuite les nucléotides pour étendre les amorces, ce qui a pour effet de créer deux copies du fragment d'ADN cible. Des cycles répétés de dénaturation, d'hybridation et d'élongation produisent des augmentations exponentielles du nombre de fragments d'ADN cibles en quelques heures à peine. Si la séquence cible n'est pas présente, il ne se produit aucune amplification détectable.

Le système BAX® simplifie ce processus en combinant les amorces, la polymérase, les nucléotides et le témoin positif dans une seule tablette d'échantillon déjà emballée dans des tubes PCR. De plus, la détection automatique par fluorescence permet les tests en tubes fermés, éliminant la possibilité de contamination entraînée avec l'ADN amplifié.