SUPPLÉMENT À LA MÉTHODE MFLP-28
DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE SANTÉ ET
DES ALIMENTS
OTTAWA
Supplément à la méthode MFLP-28
Janvier 2004
(Version PDF)
1. APPLICATION
Les renseignements qui suivent sont présentés
à titre de supplément à la méthode
MFLP-28, datée de juin 2003, et devraient être
utilisés avec cette méthode. Ce supplément
vise à fournir des renseignements supplémentaires
sur le temps d'incubation pour les produits laitiers et
les autres d'aliments. Des formulations de milieux sont
également incluses.
6. MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENTS SPÉCIAUX
Note : Le superviseur du laboratoire doit
s'assurer que l'analyse décrite dans la
présente méthode est effectuée
conformément à la norme internationale «
ISO/IEC 17025:1999 (ou dernière révision) :
Prescriptions générales concernant la
compétence des laboratoires d'étalonnages et
d'essais ».
Note : Il incombe à chaque laboratoire
de s'assurer que les incubateurs ou les bains-marie sont
maintenus aux températures recommandées.
Lorsqu'une température de 35 °C est
recommandée, l'incubateur peut être à 35
± 1 °C. De même, des températures plus
basses comme 30 ou 25 °C peuvent se situer à ±
1 °C. Toutefois, lorsque des températures plus
élevées sont recommandées, comme 43 ou 45,5
°C, il est impératif de maintenir la
température des incubateurs ou des bains-marie à
± 0,5 °C de variation; des températures plus
élevées peuvent être létales pour le
micro-organisme qu'on cherche à isoler.
7. MARCHE À SUIVRE
7.1. Prélèvement et enrichissement des
échantillons
Type d'échantillon
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Enrichissement primaire
|
Enrichissement secondaire
|
Viande et volaille transformées
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon UVM. Incuber à 30 °C
pendant 22 à 24 heures.
|
Après 22 à 24 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
Produits de viande et de volaille crus
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon Demi Fraser. Incuber à 30
°C pendant 22 à 24 heures.
|
Après 22 à 24 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
Produits laitiers
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon d'enrichissement
sélectif complet. Incuber à 30 °C
pendant 22 à 24 heures.
|
Après 22 à 24 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
Fruits, légumes et produits de la mer
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon d'enrichissement. Incuber
à 30 °C pendant 4 heures. Après 4
heures, ajouter les agents de sélection
acriflavine, acide nalidixique et cycloheximide.
Incuber à 30 °C pendant 22 à 26 heures.
|
Après 22 à 26 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
Poisson fumé
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon de pré-enrichissement
universel. Incuber à 30 °C pendant 22 à
26 heures.
|
Après 22 à 26 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
Autres aliments
|
Peser 25 g d'échantillon dans un
récipient stérile. Homogénéiser
avec 225 ml de bouillon d'enrichissement. Incuber
à 30 °C pendant 4 heures. Après 4
heures, ajouter les agents de sélection
acriflavine, acide nalidixique et cycloheximide.
Incuber à 30 °C pendant 22 à 26 heures.
|
Après 22 à 26 heures, transférer 0,1 ml
de l'échantillon enrichi dans 9,9 ml de
MOPS-BLEB. Incuber à 35 °C pendant 18 à
24 heures.
|
9. PRÉPARATION DES MILIEUX
9.1 Bouillon d'enrichissement
Poudre du bouillon de tryptone soya
|
30,0 g
|
Extrait de levure
|
6,0 g
|
Phosphate de potassium
|
1,35 g
|
Phosphate de disodium
|
9,6 g
|
Eau distillée
|
1,0 L
|
Distribuer en volumes de 225 ml et stériliser à 121
°C pendant 15 minutes. Ajouter ensuite 2,5 ml de
pyruvate de sodium 10 (p/v) stérilisé par
filtration. Préparer les suppléments
d'acriflavine et d'acide nalidixique sous forme de
solutions mères de 0,5 % (p/v) dans de l'eau
distillée. Préparer le supplément de
cycloximide sous forme de solution mère de 1,0 % (p/v)
dans une solution 40 % (v/v) d'éthanol dans de
l'eau. Ajouter les solutions mères : 0,45 ml
d'acriflavine, 1,8 ml d'acide nalidixique et 1,15 ml
de cycloheximide à 225 ml du bouillon
d'enrichissement. Le pH final devrait se situer à
7,3 ± 0,1.
9.2 Bouillon d'enrichissement sélectif complet
Poudre du bouillon de tryptone soya
|
30,0 g
|
Extrait de levure
|
6,0 g
|
Eau distillée
|
1,0 L
|
Ajuster le pH à 7,3 ± 0,1. Distribuer 225 ml et
stériliser à l'autoclave. Préparer les
suppléments d'acriflavine et d'acide nalidixique
sous forme de solutions mères de 0,5 % (p/v) dans de
l'eau distillée. Préparer le supplément de
cycloximide sous forme de solution mère de 1,0 % (p/v)
dans une solution 40 % (v/v) d'éthanol dans de
l'eau. Ajouter les solutions mères: 0,45 ml
d'acriflavine, 1,8 ml d'acide nalidixique et 1,15 ml
de cycloheximide à 225 ml du bouillon
d'enrichissement.
9.3 Bouillon UVM
Protéose peptone
|
5,0 g
|
Tryptone
|
5,0 g
|
Poudre Lab Lemco (Oxoid)
|
5,0 g
|
Extrait de levure
|
5,0 g
|
Chlorure de sodium
|
20,0 g
|
Phosphate de potassium
|
1,35 g
|
Phosphate de sodium
|
12,0 g
|
Esculine
|
1,0 g
|
Acide nalidixique (2% dans du NaOH 0,1 M)
|
1,0 ml
|
Acriflavine HCl
|
12,0 mg
|
Eau distillée
|
1,0 L
|
Distribuer en volumes de 225 ml et stériliser à 121
°C pendant 15 minutes.
9.4 Bouillon demi-Fraser
Bouillon demi-Fraser (disponible commercialement par
Difco)
|
55,0 g
|
Eau distillée
|
1,0 L
|
Ajuster le pH à 7,2 ± 0,2. Distribuer en volumes de
225 ml et stériliser à 121 °C pendant 15
minutes.
9.5 Bouillon d'enrichissement Listeria tamponné au
MOPS (MOPS-BLEB).
Bouillon trypticase-soya
|
30,0 g
|
Acide libre de MOPS
|
6,7 g
|
Sel de sodium de MOPS
|
10,5 g
|
Extrait de levure
|
6,0 g
|
Eau distillée
|
1,0 L
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Autoclaver pendant 15 minutes à 121 °C.
Préparer des solutions mères 0,5 % (p/v)
d'acriflavine et d'acide nalidixique dans de
l'eau distillée. Préparer la cycloheximide sous
forme de solution mère de 1% dans un mélange
éthanol/eau distillée 40 % (v/v). Toutes les
solutions mères sont stérilisées par
filtration. Ajouter respectivement 3 ml, 8 ml et 5 ml des
solutions mères d'acriflavine, d'acide
nalidixique et de cycloheximide à un litre de bouillon
d'enrichissement Listeria.
9.6 Bouillon de pré-enrichissement universel
Tryptone
|
5,0 g
|
Protéose peptone
|
5,0 g
|
Phosphate de potassium
|
15,0 g
|
Phosphate de sodium
|
7,0 g
|
Chlorure de sodium
|
5,0 g
|
Dextrose
|
0,5 g
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Sulfate de magnésium
|
0,25 g
|
Citrate de fer ammoniacal
|
0,1 g
|
Pyruvate de sodium
|
0,2 g
|
Eau distillée
|
1,0 L
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Chauffer les ingrédients tout en agitant doucement pour
dissoudre, puis distribuer et autoclaver à 121 °C
pendant 15 minutes. Le pH final devrait se situer à 6,3
± 0,2.
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