Procédure de laboratoire MFLP-78
Avril 2002
(Version PDF)
DIRECTION GÉNÉRALE DES PRODUITS DE SANTÉ ET DES ALIMENTS
OTTAWA
IDENTIFICATION DES LISTERIA MONOCYTOGENES PRÉSUMÉS POSITIFS DANS LES ALIMENTS
ET LES ÉCHANTILLONS ENVIRONNEMENTAUX AU MOYEN DE L'AMPLIFICATION EN CHAÎNE PAR
POLYMÉRASE (ACP)
Burton W. Blais et Lucille M. Phillippe
Laboratoire d’analyse des aliments
Laboratoire d’Ottawa (Carling)
Agence canadienne d’inspection des aliments
Édifice 22, FEC
Ottawa (Ontario) Canada
K1A 0C6
bblais@inspection.gc.ca
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Franco Pagotto et Nathalie Corneau
Bureau des dangers microbiens
Direction des aliments
Santé Canada
Repère postal : 2204A2
Ottawa (Ontario) Canada
KlA 0L2
Franco_Pagotto@hc-sc.gc.ca
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1. APPLICATION
Cette méthode permet une identification rapide de Listeria monocytogenes isolé
dans les aliments, de même que dans les échantillons environnementaux et cliniques, au
moyen des méthodes MFHPB-30 (5.5), MFLP-38 (5.6) et MFLP-74 (5.4) de Santé Canada. Elle
peut s'appliquer à la caractérisation et à l'identification de colonies
présumées positives qui sont isolées sur des géloses sélectives comme Palcam
(PAL), Oxford (OX) et Oxford modifiée (MOX) et sur toute autre gélose
régulièrement utilisée pour isoler cet agent pathogène. La méthode de la
DPGS peut aussi servir à confirmer les colonies trouvées positives par amplification en
chaîne par polymérase (ACP). La méthode d'amplification en chaîne par
polymérase (ACP) est protégée par des brevets américains dont le titulaire est
Hoffman-LaRoche. Cette méthode révisée remplace la méthode MFLP-78 datée de
septembre 1995.
2. PRINCIPE
Après pré-enrichissement et enrichissement sélectif, un certain nombre de colonies
présumées positives décelées par ensemencement sur géloses sélectives
sont soumises à une ACP qui amplifie une séquence d'ADN spécifique du gène codant
pour la listériolysine (hlyA). Les oligonucléotides servant d'amorce pour l'ACP
sont hautement spécifiques à Listeria monocytogenes et n'amplifient pas l'ADN
présent chez les autres espèces de Listeria ni chez les autres organismes. Le
fragment d'ADN hlyA amplifié qui en résulte a une taille moléculaire
spécifique définie par les amorces et est facilement identifié par
électrophorèse sur gel d'agarose.
Cette méthode permet d'identifier les colonies présumées positives en quatre heures
et, dans la plupart des cas, peut remplacer la gamme habituelle de tests biochimiques et
d'épreuves de confirmation, ce qui représente des économies considérables de
temps, de travail et d'argent. La technique d'ACP s'est révélée hautement
spécifique et sensible pour l'identification de L. monocytogenes (5.1) isolé dans
divers produits, y compris les produits laitiers, les oeufs, le fromage et les échantillons
environnementaux (5.2).
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