3. MODE OPÉRATOIRE
Il faut effectuer l'épreuve conformément aux instructions suivantes:
3.1 Préparation des portions à l'essai
3.1.1 Prendre soin de ne pas contaminer la verrerie avec du phénol, du crésol ou d'autres substances phénoliques. Ne pas laver la verrerie avec du détergent renfermant des substances phénoliques.
3.1.2 S'il s'agit de lait ou d'autres produits laitiers à l'état liquide, transférer, à l'aide d'une pipette, des portions d'un ml des unités d'échantillonnage dans des éprouvettes de 25 sur 150 mm.
3.1.3 Étant donné que la salive renferme de la phosphatase, ne pas transférer à la pipette en utilisant la bouche.
3.1.4 S'il s'agit de fromage, déposer des quantités de 0,5 g (prélevées à au moins 0,5 pouce sous une surface exposée) dans des éprouvettes, ajouter 0,5 ml d'eau, laisser tremper pendant 10 min et mélanger le fromage avec une tige de verre épais pour le transformer en pâte.
3.1.5 Ne pas toucher les portions de fromage à analyser. Peser le fromage sur des morceaux de papier glacé ou sur des nacelles de pesage que l'on peut jeter après chaque pesage.
3.1.6 S'il s'agit de beurre, fondre celui-ci à la plus basse température possible (approximativement 40oC) et laisser le sérum aqueux se séparer. Traiter les portions de 1 ml de sérum selon la technique utilisée pour le lait.
3.2 Matériel
(1) Colorimètre pour mesures à 620 nm
(2) Bain-marie à 37oC
(3) Matériel classique de laboratoire
3.3 Réactifs
3.3.1 Tampon. Dissoudre 23,0 g de Na2CO3 anhydre et 20,3 g de NaHCO3 anhydre, dans de l'eau et diluer à 2000 ml.
3.3.2 Substrat du tampon. Dissoudre 270 mg de phénylphosphate disodique (exempt de phénol) dans 250 ml de tampon. À préparer seulement lorsque vous êtes prêt à faire l'épreuve.
3.3.3 Solution de carbonate de sodium à 8% (p/v). Dissoudre 80 g de Na2CO3 anhydre dans 1 000 ml d'eau.
3.3.4 Solution d'acides trichloracétique et chlorhydrique. Dissoudre 12,5 g d'acide trichloracétique dans de l'eau, diluer à 25 ml avec de l'eau, ajouter 25 ml d'HCl (à environ 36%), et mélanger.
3.3.5 Solution de Calgon. Dissoudre 10 g d'hexamétaphosphate de sodium dans de l'eau et diluer à 100 ml. Le pH de cette solution doit être d'environ 6,3.
3.3.6 Solution de 2,6-dichloroquinonechloroimide (CQC) (à 0,02% (p/v)). Dissoudre 10 mg de CQC dans 25 ml d'alcool éthylique absolu et ajouter 25 ml d'eau. Conserver la solution à l'obscurité et la refaire chaque jour.
3.3.7 Solution-mère de phénol (1 000 µg/ml). Dissoudre 100 mg de cristaux secs de phénol dans de l'eau et diluer à 100 ml.
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