3. MODE OPÉRATOIRE
Chacune des dix unités d'échantillonnage doit être analysée individuellement.
Il faut effectuer les épreuves conformément aux instructions suivantes:
3.1 Manipulation des unités d'échantillonnage
Ne pas entreposer les unités d'échantillonnage pour plus de 24 h avant l'analyse.
3.2 Préparation des milieux
Il faut utiliser les milieux suivants après les avoir préparés et stérilisés selon les instructions du fabricant.
3.2.1 Bouillon de lauryl-sulfate-tryptose (LST)
3.2.2 Bouillon lactosé au vert brillant et sels biliaires 2% - BGLB
3.3 Préparation des dilutions
Seules les unités d'échantillonnage non diluées sont requises.
3.4 Épreuve de présomption
3.4.1 Le milieu utilisé est le bouillon LST, réparti en volumes de 10 ml dans des éprouvettes contenant des ampoules à gaz (éprouvettes de Durham renversées).
3.4.2 Disposer les éprouvettes de bouillon LST en rangées de cinq et les marquer en identifiant l'échantillon, l'unité d'échantillonnage et la dilution à ensemencer.
3.4.3 Ensemencer chacune des cinq éprouvettes renfermant du bouillon LST à teneur double avec 10 ml de l'unité d'échantillonnage non diluée; ensemencer chacune des cinq éprouvettes renfermant du bouillon LST à teneur simple avec 1 ml de l'unité d'échantillonnage non diluée; et ensemencer chacune des cinq éprouvettes renfermant du bouillon LST avec 0,1 ml de chaque unité d'échantillonnage non diluée.
3.4.4 Mélanger délicatement l'inoculum et le milieu par agitation ou par rotation, mais éviter que de l'air ne reste emprisonné dans les ampoules à gaz.
3.4.5 Incuber les éprouvettes ensemencées de bouillon LST à 35oC ± 0,5o pendant 24 ± 2 h. Examiner s'il y a eu production de gaz, inscrire les résultats, et, le même jour, commencer l'épreuve de confirmation pour toutes les éprouvettes positives (contenant du gaz) (voir la section 3.5 cidessous).
3.4.6 Incuber les éprouvettes négatives pendant 24 ± 2 h supplémentaires, examiner, inscrire le nombre d'éprouvettes positives, l'ajouter aux résultats obtenus à l'étape 3.4.5, ci-dessus, et commencer l'épreuve de confirmation pour les éprouvettes positives supplémentaires.
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