Procédure de laboratoire MFLP-94
septembre 2000
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1. APPLICATION

La méthode sert à détecter la présence d’Escherichia coli O157:H7 dans les cubes de bœuf cru, le bœuf haché cru et les échantillons environnementaux afin d’en déterminer la conformité avec les exigences des articles 4 et 7 de la Loi des aliments et drogues.

2. DESCRIPTION

Une étude de l’AOAC (8.1) a démontré que cette méthode donne des résultats satisfaisants avec les cubes de bœuf cru et le bœuf haché cru contaminés artificiellement et les échantillons environnementaux prélevés sur de l’acier inoxydable. Le Comité des méthodes microbiologiques a approuvé cette méthode pour détecter la présence d’E. coli O157:H7 dans le bœuf cru et les échantillons environnementaux seulement. Il faut analyser les autres produits alimentaires au moyen des autres méthodes disponibles dans le Compendium.

3. PRINCIPE

À la suite de l’enrichissement sélectif dans le bouillon Reveal de 8 h, on dépose une partie de l’échantillon enrichi dans la cupule de l’unité d’essai Reveal, il y a migration dans la fenêtre de visualisation. L’unité d’essai Reveal contient des anticorps qui ont une grande spécificité pour les antigènes d’E. coli O157:H7. Les anticorps sont fixés à de l’or en suspension colloïdale et aussi, d’autre part, à une matrice de soutien solide. Tout antigène d’E. coli O157:H7 présent se fixera aux anticorps conjugués à l’or pour former un complexe antigène – anticorps – chromogène. Ce complexe traverse une membrane à évacuation latérale et est fixé ensuite par l’anticorps immobilisé sur la membrane. La fixation provoque la précipitation du conjugat d’or et forme une ligne visible, ce qui indique une réaction positive. Une ligne de contrôle qui se forme plus haut dans la fenêtre de visualisation indique que le test s’est déroulé et s’est terminé comme il se doit et vérifie la validité du test. L’absence de ligne de contrôle rend le test non valide. Consigner les résultats après quinze minutes d’incubation.

4. DÉFINITIONS

Voir annexe A du volume 3, termes 1,2,3,4.

5. PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS

Voir annexe B du volume 3.

6. MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENT SPÉCIAL

1) Système Reveal (Neogen Corporation; téléphone : 1-800-234-5333, télécopieur : (517) 372-0108.

2) Bouillon Reveal de 8 h (Neogen Corporation)

3) BCM O157:H7 de Biosynth + gélose chromogène (Biosynth, Naperville, IL)

4) Gélose de coli hémorragique

5) Gélose de MacConkey avec sorbitol (Acumedia, Baltimore, MD)